細胞轉染的影響因素

　　細胞轉染的影響因素
 

　　做轉染實驗時，除了選擇合適的轉染試劑，還需要對轉染條件進行優(yōu)化，以便獲得轉染效果。那么你知道影響細胞轉染的因素有哪些嗎？讓我們一起來看看吧！
 

　　一、細胞狀態(tài)
 

　　細胞狀態(tài)不好，會導致轉染效率低下，因此，轉染前要求良好的細胞狀態(tài)和細胞活性。轉染時細胞密度以70~90%(貼壁細胞)或2×106~4×106細胞/mL(懸浮細胞)為宜，一般不建議用生長幾天或傳代次數(shù)少的細胞做轉染，細胞密度過高會嚴重影響細胞狀態(tài)(周期進程阻滯，凋亡增加等)，細胞密度過低可能會導致生長異?；蛘哂捎谵D染試劑對細胞的毒性導致細胞死亡。
 

　　二、質粒
 

　　為實現(xiàn)高效率、低毒性的轉染，應使用高質量的質粒，結構完整，純度高，無污染，無菌，無內毒素。如果質粒不純，帶少量鹽離子，蛋白、代謝物污染等都會顯著影響轉染復合物的有效形成；而含有內毒素的質粒對細胞存在很大的毒性作用。另外抗生素一般對真核細胞無毒，但轉染過程中細胞通透性增加，使抗生素進入細胞，從而降低細胞活性，導致轉染效率低下。
 

　　三、載體構建
 

　　若質粒基因產物對細胞有毒害作用，則轉染難以成功。轉染載體的構建選擇可調控，強度適合的啟動子很重要，可以用空載體或相同載體的其他基因作為對照排除毒性對細胞的影響。
 

　　四、轉染試劑和DNA的比例
 

　　許多轉染方法都需要優(yōu)化轉染試劑和DNA的比例。不同細胞系轉染效率通常不同，細胞系的選擇通常根據(jù)實驗需要確定，轉染試劑也應根據(jù)實驗要求和細胞特性選擇合適的，然后進行預實驗，選擇合適濃度的DNA，調整DNA與轉染試劑的比例，以獲得較高的轉染效率。
 

　　五、轉染后篩選時間
 

　　轉染后篩選不能太早或太晚，因為轉染了外源基因的細胞代謝負荷大，增殖較慢，太晚可能會被沒有外源基因轉入的細胞淹沒，導致篩選不出陽性克隆。因此一般是在轉染48h之后開始加抗生素篩選。
 

　　六、污染
 

　　細胞污染會造成轉染效率低下，為防止細胞污染應注意避免培養(yǎng)物被細菌、真菌、病毒、支原體或其他細胞種類等污染；避免培養(yǎng)的細胞被支原體污染，必要時進行支原體污染的常規(guī)篩查；避免與實驗室同時培養(yǎng)的其他種類細胞發(fā)生交叉污染。
 

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