瞬時轉染與穩定轉染的區別

　　哺乳動物細胞表達系統具有促使蛋白正確折疊和實現復雜修飾的功能，表達的蛋白更近天然狀態，能夠運用于制藥等活性要求高的領域。利用哺乳動物細胞表達系統生產蛋白通常有兩種方式：瞬時轉染與穩定轉染。那么瞬時轉染與穩定轉染的區別是什么呢？讓我們一起來看看吧！
 

　　一、瞬時轉染與穩定轉染實驗原理的異同
 

　　瞬時轉染與穩定轉染都是將目的基因轉染至特定哺乳動物細胞內，進而表達得到目的蛋白。不同的是瞬時轉染的方式外源基因并沒有轉染到細胞的染色體上而是存在于游離的載體上，這樣可以在短時間內獲得基因的表達產物，但是隨著細胞的不斷分裂增殖外源基因最終會丟失，無法繼續進行重組蛋白的生產；而利用細胞穩定轉染則會將外源基因轉染至細胞染色體上，目的基因不會隨著細胞傳代而消失，穩定轉染的細胞株能夠長期穩定的生產目的蛋白。
 

　　二、實驗操作的差別
 

　　1. 瞬時轉染與穩定轉染所用的質粒是不同的，瞬轉的質粒不需要帶有抗性，而用于穩定轉染的質粒一定要帶有特定的抗性以便于后續的克隆株篩選。另外，兩者所用的培養基及實驗試劑也有所區別。
 

　　2. 瞬時轉染的操作比構建穩定細胞系的操作簡單，構建好質粒后，經過細胞復蘇、轉染、細胞培養、蛋白純化等步驟即可得到目的蛋白；而構建穩定細胞系需要先將構建好的質粒線性化，再導入培養好的哺乳動物細胞內，通過一定的轉染方式實現質粒與細胞的融合，接著經過細胞池篩選、單克隆篩選、細胞傳代培養等步驟才能得到穩定轉染的細胞系。對穩定細胞系進行培養能夠長期穩定的生產目的蛋白。
 

　　三、應用場景
 

　　瞬時轉染表達和穩定轉染表達顯著的區別就是在時間上。瞬時轉染在轉染后四天即能收獲細胞，瞬時轉染一般用于基因產物的短期表達、蛋白質的小規模合成。相對于瞬時轉染，穩定轉染表達適用于長期的藥理學研究遺傳調控機制研究及大規模的蛋白質合成，需要大量的周期，因此更費力成本投入高。
 

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