百奧醫(yī)藥骨組織解離試劑盒的使用方法

百奧醫(yī)藥骨組織解離試劑盒可用于骨組織樣本單細(xì)胞懸液制備，可廣泛應(yīng)用于高通量單細(xì)胞測(cè)序等相關(guān)科學(xué)研究實(shí)驗(yàn)。那么你知道百奧醫(yī)藥骨組織解離試劑盒的使用方法是什么嗎？讓我們一起來(lái)看看吧！

一、使用方法：

1、用滅菌的剪刀或手術(shù)剪將組織切成小塊

2、在冰上將組織塊兒加入適當(dāng)?shù)腞PMI 1640培養(yǎng)基或PBS緩沖液，清洗至少3次，去除多余xue漬和雜質(zhì)

3、將洗干凈的組織剪碎，剪的越碎越好，增大和消化試劑接觸的面積。加入適量的消化試劑。顛倒混勻。

4、放置于酶作用的最佳溫度下，一般37°C，進(jìn)行孵育，每隔5分鐘震蕩混勻。

5、不同類型、狀態(tài)的組織消化時(shí)間不同，每隔一定的時(shí)間質(zhì)檢一次細(xì)胞懸液，根據(jù)細(xì)胞總量及活性等確定消化停止時(shí)間。對(duì)于某些腫瘤組織或其他較致密結(jié)締組織，消化時(shí)間4~48h，對(duì)于容易消化的組織可以采用37°C 消化15-45分鐘，也可以根據(jù)具體情況而定。如組織塊已分散而失去塊的形狀，一經(jīng)搖動(dòng)即成細(xì)胞團(tuán)或單個(gè)細(xì)胞，可以認(rèn)為已消化充分。

6、消化完成后，用合適的細(xì)胞篩進(jìn)行過(guò)濾，收集濾液。

7、讓細(xì)胞沉降并倒出多余的含酶液體。

8、用PBS緩沖液洗滌并重復(fù)2-3次。加入適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基或緩沖液，重懸細(xì)胞。

9、用細(xì)胞計(jì)數(shù)儀對(duì)細(xì)胞懸液進(jìn)行質(zhì)控并記錄

二、測(cè)試效果

使用該組織解離試劑盒將新鮮人骨組織消化解離為單細(xì)胞懸液，利用CountStar全自動(dòng)細(xì)胞熒光分析儀檢測(cè)細(xì)胞活性（AO/PI染色）、結(jié)團(tuán)率、活細(xì)胞濃度、細(xì)胞直徑等參數(shù)。然后進(jìn)行10x Genomics平臺(tái)單細(xì)胞建庫(kù)測(cè)序，獲取數(shù)據(jù)。

制備的單細(xì)胞懸液質(zhì)量較高，活性可達(dá)83.85%，結(jié)團(tuán)率僅為3.35%，其他參數(shù)也均能滿足高通量單細(xì)胞測(cè)序研究相關(guān)實(shí)驗(yàn)要求。

從曲線圖、捕獲細(xì)胞數(shù)、測(cè)序深度、獲得基因數(shù)結(jié)果初步可以看出，數(shù)據(jù)結(jié)果比較理想，例如基因中位數(shù)均在1,400個(gè)左右，較為理想。

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