Polyplus轉染試劑jetPRIME®產品問答

Q：jetPRIME^®是哪種類型的化合物？

A：jetPRIME^®是由Polyplus-transfection^®公司合成的zhuan利產品，一種新型的基于陽離子聚合物的分子。

Q：使用jetPRIME^®進行轉染時，質粒是如何導入的？

A：jetPRIME^®和DNA形成帶正電荷的復合物。這些復合物通過內吞作用進入細胞。隨后經質子海綿作用，內涵體在細胞質中釋放DNA。當有絲分裂過程中核膜消失時，質粒大多到達細胞核。

Q：我的細胞比較脆弱，無血清時不能生長。我可以嘗試在有血清的條件下進行轉染嗎？

A：與許多其他轉染試劑相反，在有血清的環境下，jetPRIME^®的效率更高。因此，轉染復合物可以直接加到含血清培養基的細胞中。

無血清培養基：Opti-MEM培養基（thermo）

Lipo2000,轉染時需要更換培養為Opti-MEM;需要用Opti-MEM復合物,轉染6小時后需要換液。對細胞毒性大。

Lipo3000, 轉染時需要更換培養為Opti-MEM;需要用Opti-MEM復合物,轉染6小時后無需換液。跟lipo2000相比，毒性小。

抗生素問題：

jetPRIME^®的轉染效率不受抗生素的影響。jetPRIME的常規批次質檢都是在含血清和抗生素的培養基中進行的。

細胞密度問題：

細胞密度和傳代次數將影響轉染效率。推薦細胞融合度在60%-80%。對于使用jetPRIME的轉染優化條件，請參考jetPRIME^®轉染說明書中的Table 1，根據不同培養板推薦的細胞數。此外，如果細胞已經培養很長時間（超過20代），建議從液氮中取新的細胞重新培養。

比值問題：

Q：DNA/jetPRIME^®的比值是什么意思？

A：該比值指的是每微克（ug）DNA相對應的jetPRIME微升數（uL）。例如，DNA/jetPRIME^®比值為1：2意思是每ug DNA加2uLjetPRIME.

優化的問題：

優化的第一步是將DNA的量增加1.5倍。推薦增加DNA/jetPRIME^®比值(每ug的DNA，2-3uLjetPRIME^®), 另一種方法是緩慢離心培養板（5min，210g）

擴大的問題：

一般來說，DNA的量應該和總細胞數成比例。參考jetPRIMEprotocol中的推薦，根據不同規格的培養皿，所需要的DNA和jetPRIME的量（Table 2）

細胞特異性問題：

Q：對于所有細胞可以使用同樣的條件嗎？

A：已優化的操作步驟可用于多種細胞，例如A549, MCF7,U2OS, NIH-3T3, B16-F10, Caco-2等。更多細胞的優化條件，請咨詢客服!

HEK-293和HeLa細胞問題：

Q：HEK-293和HeLa細胞：是否可以提供使用jetPRIME轉染HEK-293和HeLa細胞的具體建議？

A：jetPRIME對于DNA轉染HEK-293 和HeLa細胞都是非常高效的。因此，推薦減少DNA的量（例如6孔板，每孔1ug-0.5ug），使用1：2的DNA和jetPRIME比例。

懸浮細胞問題：

Q：jetPRIME^®推薦用于懸浮細胞的DNA轉染嗎？

A：懸浮細胞，例如T和B淋巴細胞是眾suo周知的難轉染DNA細胞，無論哪種化學方法的試劑都很難有較好的轉染效率。因此，通常推薦電轉或者病毒轉染核酸到懸浮細胞。

植物細胞問題：

Q：jetPRIME^®是否測試過可以用于植物細胞的轉染？

A：植物細胞富含纖維素的膜阻止了jetPRIME/DNA復合物進入細胞。甚至在脫去纖維素的原生質體階段，復合物也無法穿透進入細胞質。

HUVEC(人臍靜脈內皮細胞)問題：

Q：jetPRIME^®對HUVEC的DNA轉染是否有效？

A：對于HUVEC細胞，推薦使用jetPEI^®-HUVEC，專為該細胞的DNA轉染設計的特異性轉染試劑。可以用jetOPTIMUS替代。

原代神經元問題：

Q：對于原代培養的神經元，可以使用jetPRIME^®嗎？

A：神經元很難轉染，主要是因為其在培養的過程中不分裂。然而，jetPEI^®已被成功用于神經元的體外轉染。

巨噬細胞問題：

Q：對于DNA轉染巨噬細胞，jetPRIME的轉染效率如何?

A：jetPRIME已成功用于Raw264.7的轉染。按照standard condition,可以獲得50%的轉染效率；對于原代巨噬細胞或單核細胞、巨噬細胞衍生的巨噬細胞的DNA轉染，應選擇jetPEI-macrophage。可以用jetOPTIMUS替代

質粒共轉染問題：

Q：當我想在一個實驗中進行多個質粒的共轉染時，我該如何操作？

A：對于多個質粒的轉染，每孔DNA的總量不應超過說明書中標明的DNA量。每個質粒的比例根據質粒的大小、結構和期望的每個質粒的表達水平來應用。在每孔中，每個質粒至少應占總DNA量的10%。

復合物問題：

Q：jetPRIME^®/DNA復合物可以穩定多長時間？

A：復合物形成的15-30分鐘內是獲得最佳轉染效率的時間。因此，對于需要較長孵育時間的高通量篩選，推薦使用jetPEI進行HTS, 因為jetPEI^®/DNA復合物可以穩定長達4小時。

病毒包裝問題：

Q：jetPRIME^®是否適用于病毒包裝？

A：jetPRIME^®可以用在傳統培養基中進行病毒包裝。實際上，在用于病毒包裝的常規細胞中，使用jetPRIME^®的轉染效率可達90%，例如HEK-293及其衍生株，CHO, VERO,WOP和BHK細胞，因此會產生高病毒滴度（Dewannieux,M., Vernochet, C., Bartoscho, B., Cosset, F.L., Heidmann, T (2011).The mouseIAPE endogenous retrovirus can infect cells through any of the fiveGPI-anchored Ephrin A proteins., PLoS Pthog 7, e1002）.

細胞活性問題：

Q：如何提高脆弱細胞的細胞活性（例如，原代成纖維細胞）？

A：轉染對于細胞來說是創傷事件。改進細胞活性，可參考以下建議：

-轉染后4小時更換培養基

-減少DNA的量

-減少jetPRIME^®的體積

-在含血清的培養基中進行轉染

-轉染后24小時分析轉染效率而不是48小時

-確保使用jetPRIME^® buffer稀釋jetPRIME和DNA

-檢測質粒不含內毒素

質粒大小問題：

Q：使用jetPRIME^®做DNA轉染會有質粒大小的限制嗎？

A：使用jetPRIME^®做DNA轉染沒有質粒大小的限制。然而，記住同樣的DNA量，大質粒的基因拷貝數比小質粒少。

siRNA問題:

Q：可以使用jetPRIME^®轉染siRNA嗎？

A：jetPRIME^®完quan可以用于siRNA轉染，使用終濃度10-50nm的siRNA。然而，如果您主要感興趣的是siRNA轉染，那么試劑INTERFERin^®是您的選擇。

保存問題：

Q：jetPRIME^®如何保存？

A：jetPRIME^®是穩定的分子。室溫運輸jetPRIME^®和它的buffer，為長期保存，應儲存在4°C。

加熱問題：

Q：當我收到jetPRIME^®試劑時，管子完quan是溫的。它是否仍然有效，能否繼續使用？

A：jetPRIME^®是非常穩定的分子。已經做了測試jetPRIME試劑穩定性的實驗。jetPRIME^®在50°C放置48小時后，仍表現出和保存在4°C時相似的轉染效率。

冷凍問題：

Q：我不小心凍存了我的jetPRIME^®試劑，我該怎么辦？

A：jetPRIME^®可以耐受偶爾的冷凍，而不影響轉染效率。然而，對于長期保存來說，建議分裝并儲存在4°C，以確保試劑長時間有效。

有效期問題：

保存適當時，jetPRIME^®cat#114-01 (0.1mL)可以保存6個月。其他規格的jetPRIME^®至少可以保存1年。

參考文獻問題：

Q：我在哪里可以找到科研人員已成功使用jetPRIME^®發表的文章？

A：在Polyplusproduct citation database,可以找到引用jetPRIME和Polyplus-transfection公司其他試劑的科研論文。

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